氮芥酒精价格是不是很高 https://m-mip.39.net/news/mipso_5231217.html

摘要：目的研究土鳖虫活性肽LL8在正常大鼠体内的药动学，并考察LL8对高脂血症大鼠模型的影响。方法采用异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）对LL8进行N端标记（FITC-LL8），SD大鼠随机分为FITC-LL8高、低剂量（10、5mg/kg）组，各给药组im相应药物，于不同时间点眼眶取血，采用EnSpire多标记微孔板检测酶标仪，辅以DAS2.0药动学数据处理软件，以偏最小二乘法为计算原则，根据药动学理论得出FITC-LL8在SD大鼠体内的药动学变化。SD大鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀（mg/kg）组、土鳖虫（3g/kg）组和LL8高、低剂量（50、25mg/kg）组，采用高脂饲料诱导建立高脂血症大鼠模型，各给药组ig相应药物，1次/d，连续3周，检测各组大鼠血浆中总胆固醇（totalcholesterol，TC）、三酰甘油（triglycerides，TG）和低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C）水平；检测各组大鼠肝脏组织中TC和TG水平；采用苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠肝组织病理变化。结果高、低剂量LL8在SD大鼠体内的代谢趋势相似。与对照组比较，LL8组大鼠血浆中TG、TC和LDL-C水平显著降低（P＜0.05），肝脏组织中TG、TC水平显著降低（P＜0.05、0.01）。模型组大鼠肝脏组织内出现明显脂肪空泡与脂滴，各给药组大鼠肝脏脂肪变性明显改善。结论LL8在SD大鼠体内半衰期较短，且能够抑制大鼠肝脏脂肪堆积，具有调血脂作用。

土鳖虫，又称土元，为鳖蠊科昆虫地鳖EupolyphagasinensisWalker或冀地鳖Steleophagaplancyi(Boleny)的雌虫干燥体，主要用于治疗跌打骨折、血瘀密闭等症，中医临床定义其为破血逐瘀、续筋接骨之要药[1]。现代药理学研究表明，土鳖虫具有抗血栓、调血脂、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等作用[2-5]。鉴于土鳖虫传统的口服给药特点及人体消化道对蛋白质药物的消化吸收原理，本课题组前期采用胃蛋白酶和胰蛋白酶复合酶系对土鳖虫进行仿生酶解，经过除盐、超滤、纳滤、DA-C型大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶G-25色谱、反相高效液相色谱以及半制备液相色谱等技术分离纯化后，获得纤溶活力最强的土鳖虫活性肽组分F2，且F2具有改善急性血瘀模型大鼠血液流变学指标、调节血脂和血液因子水平的作用[2,6]。药动学是反映药物在机体内吸收、分布、代谢、排泄全过程，并运用数理知识和方法论阐述血药浓度变化的综合知识体系[7]。随着现代分析设备的普及与测试方法的更新，蛋白或活性肽类药物在机体内的变化也能够被反映出来，如人体信使因子谷胱甘肽在体内的分布和衰老的研究，可以借助I、2H、13C等放射性同位素标记示踪其活动规律[8-11]；藻酸双酯钠等多糖类药物的多羟基酚酸类结构体征，可以采用罗丹明、异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）和溴酚蓝等有色极性溶剂进行络合标记[12]，进而基于络合物发色光转移的原理运用紫外分光光度法、荧光分析方法进行分析，得出其药动学变化规律。因此，采用标记示踪技术可以实现蛋白或活性肽类药物的体内分析[13]。本课题组前期研究表明，土鳖虫活性肽F2组分具有调血脂活性，但其所含单体活性肽序列以及体内药理作用尚未明确。本研究采用基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱（MADIL-TOF/TOF-MS）对前期纯化得到的土鳖虫单体活性肽进行肽序鉴定，对其中含量最高的活性肽LL8用FITC标记后进行药动学研究，并进行LL8的调血脂作用研究。

1材料

1.1动物

SPF级雄性SD大鼠，6周龄，体质量（±10）g，购自山东省朋悦实验动物繁育中心，动物许可证号SCXK（鲁）90003。动物饲养于SPF级实验动物中心，温度22～26℃、相对湿度（50±2）%。动物实验经山东中医药大学伦理委员会批准（批准号SDUTCM90515001）。

1.2药材

土鳖虫（批号90107）购自山东省长清土元养殖场，经山东中医药大学代龙教授鉴定为鳖蠊科冀地鳖S.plancyi(Boleny)的雌虫干燥体。

1.3药品与试剂

去离子水购自浙江娃哈哈纯净水公司；辛伐他汀（批号J80007）购自德国Merck公司；乙醚（批号）、无水乙醇（批号81111）购自国药集团化学试剂有限公司；水合氯醛（批号3001）购自成都市科隆化学品有限公司；总胆固醇（totalcholesterol，TC）测定试剂盒（批号90811）、三酰甘油（triglycerides，TG）测定试剂盒（批号90709）、低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C）测定试剂盒（批号90529）购自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4仪器

BPH-型精密恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；HH-型超级恒温水浴锅（镇江瑞祥仪器有限公司）；MS型十万分一天平、MS型万分之一天平（梅特勒-托利多国际贸易上海有限公司）；EnSpire多模式微孔板检测系统（珀金埃尔默企业管理上海有限公司，由山东省科学院分析测试中心提供）；TG20W型台式高速冷冻式离心机（博科精密仪器有限公司）；KQ2DV型超声振荡仪（杭州法兰特超声波科技有限公司）；AμtoflexII型MADIL-TOF/TOF-MS（德国布鲁克工公司）；电子显微镜（日本尼康公司）。

2方法与结果

2.1LL8氨基酸序列分析与结构预测

采用MADIL-TOF/TOF-MS对本课题组前期经分离纯化得到的土鳖虫活性肽组分F2[9]进行氨基酸序列分析。LL8二级质谱图见图1，经解析，其肽序为LAPAPGTL，即亮氨酸-丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸，命名为LL8。采用pepdraw（