中药材及部分制剂中黄曲霉毒素残留筛查报告

重要小贴士

中药大品种联盟近期正在征集专家库成员,我们殷切欢迎有技术、有能力、有经验,愿意为中药大品种培育、为中药产业贡献力量的优秀人才,加入中药大品种联盟。详细信息请查看平台功能栏中的通知,或直接点击文章最下方阅读原文进行报名。

⊙作者:刘丽娜,金红宇,孙磊,马双成

⊙编辑:小余

黄曲霉毒素(AF)为黄曲霉、寄生曲霉、集峰曲霉和伪溜曲霉4种曲霉的次生代谢产物,是一组化学结构类似的二呋喃香豆素类衍生物。黄曲霉毒素为目前已知的毒性最强的化合物之一,年被国际癌症研究会(IARC)确认为I类致癌物质,世界卫生组织(WHO)及各国家、地区对黄曲霉毒素在食品、农产品中的残留量均执行最严格的监管。

黄曲霉毒素致癌性明确,是一种毒性极强的剧毒物质。在4种主要的黄曲霉毒素中,黄曲霉毒素B1在自然界分布最广,毒性和致癌性也最强,其急性毒性是氰化钾的10倍,砒霜的68倍。亚致死量产生慢性中毒,慢性中毒可诱发肝癌,长期接受低剂量导致肝癌。

黄曲霉毒素可通过多种途径污染食品和饲料,直接或间接进入人类食物链,从而威胁人类健康和生命安全,对人体及动物器官尤其是肝脏损害严重,其诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍。中药在采集、贮藏、制备、运输过程中如保存不当极易受潮霉变而污染黄曲霉毒素。尤其是种子、果实类中药材、发酵类中药及含以易污染黄曲霉毒素的中药材为处方成分的中成药,都易污染黄曲霉毒素。

《中国药典》年版一部新增了黄曲霉毒素测定法并在陈皮、酸枣仁、桃仁、胖大海、僵蚕等5种药材检查项下增加了黄曲霉毒素检查项,规定黄曲霉毒素限量为:每g药材含黄曲霉毒素B1不得过5μg,含黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。其他中药材及中成药中并未设置黄曲霉毒素检查项,也没有限度要求。那么中药材及中成药的污染现状如何呢?针对高风险品种,应设置什么样的限量要求?为此,我们对近年来实验室的黄曲霉毒素测定数据进行归纳总结,按照风险评估的基本步骤对中药材及部分制剂中黄曲霉毒素做初步的风险评估,筛选出高风险品种,为黄曲霉毒素限量检查项的设置提供数据支持。

1仪器和材料

Waters型高效液相色谱单元,配Waters荧光检测器(美国Waters公司);光化学衍生器(美国Vicam公司,紫外灯nm);AE型十万分之一电子分析天平(瑞士Mettler公司);旋转振荡器(江苏太仓市实验设备厂);Z离心机(德国Hermle公司);Milli-Q超纯水处理系统。

甲醇、乙腈均为色谱纯;水为高纯水;黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2)(中国食品药品检定研究院,Lot:61-);黄曲霉总量(B1、B2、G1、G2)免疫亲和色谱柱(北京华安麦科生物技术有限公司);药材及中成药均来源于国内药材市场、药店、医院(包括年和年的抽验品种)。

2实验方法

2.1色谱条件与系统适用性实验

色谱柱为VenusilMPC18(4.6mm×mm,5μm);柱温:40℃;以甲醇-乙腈-水为流动相,按表1中的梯度比例进行梯度洗脱,流速1.1mL·min-1;采用柱后光化学衍生法:光化学衍生器(nm);以荧光检测器检测,激发波长λex=nm,发射波长λem=nm。进样量:50μL。

2.2随行质量控制

由于所采用的方法为《中国药典》年版附录通用方法,故仅以随行质量控制(包括随行空白实验及随行回收实验)来评估方法的可行性。

2.2.1检测限

取混合对照品溶液(5ng·mL-1),进样量1μL,计算B1峰信噪比为12,则当供试品溶液中药材含量为0.25g·mL-1时,本实验检测限(报告限)为黄曲霉毒素B1:0.5μg·kg-1,黄曲霉毒素总量:0.5μg·kg-1。

2.2.2空白溶液

取体积分数70%甲醇溶液50mL,按《中国药典》年版附录ⅨⅤ黄曲霉毒素测定法“供试品溶液的制备”项下方法自“离心5min”起操作,即得。

2.2.3随行回收率实验

取供试品粉末5g,加入混合对照品储备液(黄曲霉毒素B1含量为ng·mL-1)1mL,加体积分数70%甲醇溶液至50mL,按《中国药典》年版附录ⅨⅤ黄曲霉毒素测定法“供试品溶液的制备”项下方法操作,即得。结果见表2。

3样品测定

中国食品药品检定研究院对中药中黄曲霉毒素残留量测定法进行了深入研究,同时开展了样品筛查普查,涉及余种常用中药材、部分中成药制剂,总计近2批次样品。这个平台为黄曲霉毒素的暴露评估提供了重要的数据。这些药材来源于各个省市,具备一定的代表性。黄曲霉毒素的总体检出率约为7.7%,如果按照《中国药典》年版陈皮等品种项下限量标准,总体合格率接近97%,即使按最严格的欧盟标准,合格率也在95%以上。同时,我们也对日常检验中所涉及的品种进行了归纳整理。部分中药材样品筛查数据统计表见表3。

从表3中可以看出,虽然黄曲霉毒素整体的检出率不高,但是部分品种的黄曲霉毒素污染却是不容忽视的,黄曲霉毒素污染集中于个别药材品种,如柏子仁、肉豆蔻、莲子、使君子、槟榔等,这些药材检出率在70%以上,不合格率也极高,个别品种超标达数十倍。而年版《中国药典》收载的进行黄曲霉毒素检查的品种,虽有一定的检出率,但合格率为%。

处方中含有易染黄曲霉药材的部分中成药品种,黄曲霉检出率及不合格率也很高。参苓白术散为传统中成药,收录于《中国药典》年版一部。该品种处方中含有的莲子等容易被黄曲霉污染。50批参苓白术散、9批参苓白术颗粒、13批参苓白术丸样品的黄曲霉毒素测定结果表明只有一批样品未检出黄曲霉毒素,有38批参苓白术散样品不符合规定,不合格率达76%,参苓白术丸的不合格率为30.8%,参苓白术颗粒不合格率为11%。活血止痛散为当归、三七、乳香(制)、冰片、土鳖虫、煅自燃铜6味药材原粉直接入药,土鳖虫为易霉变药材,尤其在潮湿贮存状态下,容易滋生霉菌,34批活血止痛散的黄曲霉毒素检出率为89%,不合格率为47%。金水宝胶囊及百令片均是采用生物工程方法分离的冬虫夏草菌种经低温发酵精制而成的。在发酵过程中,易被霉菌污染,有必要制订黄曲霉毒素检查项,以控制产品质量,保证用药安全。部分中成药统计结果见表4。从表4统计结果可以看出,部分中成药品种黄曲霉毒素存在较高的风险,建议对处方中含有高风险品种药材的中成药进行普查,尽快建立黄曲霉毒素限量检查,保证用药安全。

从黄曲霉毒素检出种类可以看出,在这4种黄曲霉毒素中,AFB1检出率最高,检出量也是最大的,而AFB1的毒性也是最强的。4种黄曲霉毒素检出率依次为AFB1>AFB2>AFG1>AFG2,这与感染的真菌种类不同有关,据报道,黄曲霉主要产生AFB1、AFB2,而寄生曲霉主要产生AFG1、AFG2。

4风险评估

风险评估在食品中应用较为广泛,由于药品在膳食结构中属于特殊膳食,其风险评估不同于食品,尝试就中药材及部分制剂中黄曲霉毒素残留风险评估做一下初步论述。

黄曲霉毒素为目前已知的毒性最强的化合物之一,但同时,黄曲霉毒素又是环境中较为广泛存在的污染源。联合国粮农组织和世界卫生组织下的食品添加剂联合专家委员会(JointFAO/WHOExpertCommitteeonFoodAdditives,简称JECFA)曾在第46次、49次和56次会议上多次评价了黄曲霉毒素,先后得出了黄曲霉毒素是可能导致人类肝癌的强致癌物。乙肝病毒可能会加强黄曲霉毒素的致癌力以及应将膳食中黄曲霉毒素的摄入量降低到尽可能低的水平来尽可能减少黄曲霉毒素对人类的危害等结论,并在第49次会议上对黄曲霉毒素的致肝癌能力进行了定量的评估。但是由于缺乏强有力的黄曲霉毒素致人类肝癌的数据资料,至今尚未提出黄曲霉毒素的每周最大耐受量或每日最大耐受量。

在通常情况下,危害描述需要确定这些危害物质与人体发生不良反应间量上的联系,即确定一个剂量-反应数学模型。一般多采用毒理学数据来模拟,比如提出每日允许摄入量ADI值等。但由于黄曲霉毒素即使在极低摄入量时,仍有致癌危险性,所以一般不能用安全系数来制定允许摄入量,对这种遗传毒性致癌物的管理办法有两种:一种是禁止商业化的使用该种化合物,另一种是制定一个极低而可忽略不计、对健康影响甚微或者社会能接受的危险性水平。美国食品药品管理局(FDA)和美国环保署(CEPA)选用的可接受的危险性水平是百万分之一,即万人中癌症发生率低于一人,这被认为代表一种不显著的危险性。由于黄曲霉毒素是在中药生产、贮藏过程中产生的,所以黄曲霉毒素应该用上述第二种方法。JECFA在年第49届会议上,经评估认为花生、玉米中黄曲霉毒素含量为20μg·kg-1时,对于低风险人群每10万人中癌症发生率为0.,即使对于高风险人群每10万人中癌症发生率为0.17。

JECFA在年第49届会议上,经评估认为将黄曲霉毒素B1的限量标准从20μg·kg-1减低到10μg·kg-1是没有公共卫生学意义的,即使对于乙肝患者这样的高风险人群,每千万人中每年也仅减少3例肝癌的发生,但是由此所采取的农业措施或丢失的粮食则是不能接受的。这也给我们应该如何制定中药中黄曲霉毒素的合理的限度提供了可参考的例证。

食品中黄曲霉毒素标准最多,也最为常见,总结了具有代表性的部分国家、地区的食品的限量标准(表5),从表5中可以看出,首先,限量标准差异比较大,比如中国美国限量是20μg·kg-1,而欧盟最严量,限量为2μg·kg-1,相差10倍,其次,将直接食用的食品和需加工的食品原料相区别,已逐渐成为主流的意见。部分国家及地区针对草药中黄曲霉毒素的相关规定见表6。就品种来说,中国香港和《欧洲药典》是要求所有草药对黄曲霉毒素都进行检查,而我国、韩国,美国都是仅针对部分品种检测黄曲霉毒素,美国不同的品种的限量标准也是不同的。就限量标准而言,欧盟最严格,韩国、《中国药典》现有标准在中间位置。

风险是毒性和暴露的函数,毒性高并不等于高危害,只有综合考虑毒性和暴露量两个因素才能对黄曲霉毒素的风险有一个正确的评价。中药性质有别于食品,中药是为达到特定治疗目的,特定人群在特定的时间内限量使用,在膳食结构中所占比例较小。按照一般食品中黄曲霉毒素的限量要求,一般不会明显增加对人体的暴露量。适度的黄曲霉毒素限量标准,能够更好的节约资源,降低行业成本,减少损失。中药中黄曲霉毒素残留主要来源于不当的加工及贮藏,目前迫切需要规范易染黄曲霉的种子、果实类药材产地初加工及饮片加工,如干燥、杀菌方法等,更急需建立中药贮藏规范,以便从源头上减少黄曲霉毒素污染的风险。

通过上述一系列测定、分析,对《中国药典》中黄曲霉毒素限量标准提出建议。阶段性严格标准,现阶段标准需从严但要适度,没有必要盲目采纳世界上最严格的标准。中药材作为经过初级加工的农产品,在制成制剂、病人服用之前一般还需要经过炮制、提取或调剂等过程,因此黄曲霉毒素限量标准可以适当放宽;中成药作为直接服用的药品,黄曲霉毒素限量应较药材更为严格。综合考虑风险评估基本原则中的成本-效益平衡原则以及中药服用特点、发展阶段以及样品普查实测数据,对《中国药典》提出以下建议。

将中药材与中成药区别对待,药材相关品种项下黄曲霉毒素限量放宽为:黄曲霉毒素B1不得过10μg·kg-1,总量不得过20μg·kg-1;将中成药相关品种项下黄曲霉毒素限量设定为:黄曲霉毒素B1不得过5μg·kg-1,总量不得过10μg·kg-1。

5结语

本实验对中药材及中成药中黄曲霉毒素普查数据进行归纳总结,并从普查数据出发,对黄曲霉毒素进行初步风险评估。

由于黄曲霉毒素在中药中并不是一种普遍的污染,仅在个别品种中有较高的检出率,所以建议不必仿照美国、欧盟的设立一致性标准,仅需对一些黄曲霉毒素检出率较高的品种进行监测。富含油脂的种子、果实类药材及经过发酵的动物类药材都是监测重点。一些中成药,如直接原粉入药的且处方中含有易污染黄曲霉毒素药材品种的中药材,或者经过发酵的中成药品种也应对黄曲霉毒素进行监测。建议增加柏子仁、莲子、槟榔、使君子、肉豆蔻、马钱子、生川乌、土鳖虫、决明子、延胡索、参苓白术系列制剂、活血止痛散的黄曲霉毒素检查项。

参考文献:略。

[本文来源:《中国药学杂志》年9月第50卷第17期,由中药大品种联盟(BBTCML)编校发表,文章仅代表作者个人观点]









































北京白癜风的有效治疗方法
白殿疯初期是什么样的



转载请注明地址:http://www.tubiechonga.com/tcpf/1622.html
  • 上一篇文章:
  • 下一篇文章:
  • 热点文章

    • 没有热点文章

    推荐文章

    • 没有推荐文章